Hoe om glycerolvoorraad voor te berei: 9 stappe (met foto's)

INHOUDSOPGAWE:

Hoe om glycerolvoorraad voor te berei: 9 stappe (met foto's)
Hoe om glycerolvoorraad voor te berei: 9 stappe (met foto's)

Video: Hoe om glycerolvoorraad voor te berei: 9 stappe (met foto's)

Video: Hoe om glycerolvoorraad voor te berei: 9 stappe (met foto's)
Video: How to Create a Cover Page in Microsoft Word (Built-In & Custom) 2024, Maart
Anonim

Glycerolvoorraad is 'n tipe suspensie wat in laboratoriumomgewings gebruik word om bakteriese kulture vir 'n lang tyd op te slaan. As vloeibare bakteriekulture by 'n 50% gliseroloplossing gevoeg word, dring die gliserol in die bakteriese selle aan, wat hulle struktureel stabiel maak en dit veilig kan stoor. Nadat u u monsters gemeng het, vries dit by -80 ° C (−112 ° F) om te verseker dat dit so lank as moontlik lewensvatbaar bly.

Stappe

Deel 1 van 3: Meng die gliseroloplossing

Berei glycerolvoorraad voor Stap 1
Berei glycerolvoorraad voor Stap 1

Stap 1. Berei 'n vloeibare kultuur voor van die bakterieë wat u wil stoor

Om 'n gliserolvoorraad effektief te wees, moet dit gekombineer word met 'n vloeibare bakteriekultuur. Om 'n vloeibare kultuur te produseer, moet u 'n bakteriële monster oornag inkubeer in 'n Erlenmeyer -kolf gevul met lysogeniese sous en die korrekte konsentrasie antibiotika.

  • Nadat u 'n vloeibare kultuur voorberei het, kan u die bakterieë in die stoor plaas of die plasmied -DNA isoleer.
  • Lysogeniese sous (ook bekend as "LB-sous" en "LB-vloeistof") is 'n soort voedingsryke vloeistof wat gebruik word om bakterieë vinnig voort te plant. Dit kan gekoop word by 'n kleinhandelaar wat laboratoriumtoerusting en materiaal verkoop.
  • Die inkubasie van bakteriekulture is 'n hoogs tegniese proses wat baie verskillende veranderlikes insluit. Om hierdie rede word dit die beste uitgevoer deur 'n opgeleide tegnikus in 'n beheerde laboratoriumomgewing.
Berei glycerolvoorraad voor Stap 2
Berei glycerolvoorraad voor Stap 2

Stap 2. Verdun suiwer gliserol in gedistilleerde water tot 'n 50% gliseroloplossing

Gebruik 'n steriele pipet om 10 ml van beide vloeistowwe af te meet en meng dit in 'n enkele fles. Roer of skud die kolf deeglik totdat die vloeistowwe eweredig gemeng is.

  • Om die gliserol te verdun, is dit nodig om te voorkom dat dit die bakteriese selle beskadig.
  • Sommige wetenskaplikes verkies om 'n glyceroloplossing van so laag as 15-40% te gebruik om die bakteriekultuur nie te benadeel nie. 'N 50% -mengsel bied egter maksimum lewensduur.
Berei glycerolvoorraad voor Stap 3
Berei glycerolvoorraad voor Stap 3

Stap 3. Plaas 50 mikroliter van die 50% gliseroloplossing in 'n mikrofugbuis

Beweeg die verdunde gliserol versigtig na die nuwe flessie om mors te vermy. U gebruik dieselfde houer om die vloeibare bakteriële kultuur van die gliseroloplossing toe te voeg en die monster in 'n koel stoor te plaas.

As dit moontlik is, gebruik 'n buis met 'n skroefblad eerder as een met 'n snap -top. Dit is bekend dat snap -buise per ongeluk tydens die vermenging en langdurige berging oopgekom het

Deel 2 van 3: Voeg die bakteriese kultuur by

Berei glycerolvoorraad voor Stap 4
Berei glycerolvoorraad voor Stap 4

Stap 1. Voeg 50 mikroliter van u vloeibare bakteriekultuur by die oplossing

Gebruik 'n vars pipet om 'n gelyke hoeveelheid vloeibare kultuur uit te meet en gooi dit direk in die gliseroloplossing in die buis. Die finale verhoudings van u gliserolvoorraad moet 50% bakterieë en 50% verdunde gliserol wees.

  • Die gebruik van oneweredige hoeveelhede gliserol en vloeibare kultuur kan die gehardheid van die bakterieë beïnvloed en die hoeveelheid tyd wat dit in die koue kan oorleef, verminder.
  • As u 'n gliseroloplossing met 'n laer konsentrasie gebruik, moet u die hoeveelheid bakteriekultuur dienooreenkomstig aanpas. Raadpleeg die literatuur oor die presiese stam wat u bêre vir meer inligting.
Berei glycerolvoorraad voor Stap 5
Berei glycerolvoorraad voor Stap 5

Stap 2. Plaas die deksel op die buis

Skroef die deksel op sy plek, of druk af totdat u 'n sagte klik hoor as u 'n buis gebruik. Bevestig dat die deksel veilig is voordat u verder gaan.

Berei glycerolvoorraad voor Stap 6
Berei glycerolvoorraad voor Stap 6

Stap 3. Skud die buis saggies om die bakteriekultuur en gliserol te meng

Klits die buis 'n paar keer heen en weer totdat albei vloeistowwe eweredig versprei is. Op hierdie punt sal die bakteriese selle stadig die gliseroloplossing begin absorbeer, wat die selmembraan stabiliseer en beskerm teen agteruitgang en temperatuurverwante skade.

Hou u duim stewig teen die deksel van die mikrofuge -buis gedruk terwyl u skud om seker te maak dat dit nie loskom nie

Deel 3 van 3: Stoor en herleef bakteriekulture

Berei glycerolvoorraad voor Stap 7
Berei glycerolvoorraad voor Stap 7

Stap 1. Benoem die bakteriese monster

Skryf die naam van die kultuur op 'n klein proefbuis -etiket of strook maskeerband en plak dit vas aan die mikrofuge -buis waar dit duidelik sigbaar sal wees. U kan ook die klassifikasie-inligting van die bakterieë direk op die deksel teken met 'n viltpen.

  • Maak ook seker dat u ander inligting opneem wat nuttig kan wees tydens die ontleding, soos die presiese stam van die monster of die oorsprong daarvan.
  • Die etikettering van u monsterhouers is 'n onontbeerlike stap in die versamelingsproses, aangesien dit u in staat stel om die inhoud by te hou terwyl dit in en buite die stoor geskuif word.
Berei glycerolvoorraad voor Stap 8
Berei glycerolvoorraad voor Stap 8

Stap 2. Vries die monster by -80 ° C (-112 ° F)

Plaas die gemerkte monster in 'n onderverkoelde laboratoriumvrieskas wat op 'n konstante temperatuur van -80 ° C (-112 ° F) gestel is. As dit onder hierdie toestande gehou word, bly die bakteriekultuur lewensvatbaar vir baie jare.

Dit is van kritieke belang dat die temperatuur van die vrieskas op −80 ° C (−112 ° F) bly. As dit warmer is, kan die bewaarde bakterieë doodgaan

Berei glycerolvoorraad voor Stap 9
Berei glycerolvoorraad voor Stap 9

Stap 3. Skraap 'n klein hoeveelheid bevrore bakterieë op om dit voor te berei vir ontleding

As dit tyd is om u monster te laat herleef, haal die mikrofugbuis uit die vrieskas en maak die deksel oop. Gebruik 'n steriele inentingslus, tandestokkie of pipetpunt om 'n klein hoeveelheid bevrore materiaal van die bokant van die monster te versamel en die bakterieë op 'n LB -agarplaat te trek vir ondersoek of toetsing.

  • Pasop dat die bakterieë nie ontdooi nie. Dit kan help om die voorraadbuis op droë ys te hou totdat u u toetse voltooi het.
  • Trek u monster slegs uit die vrieskas as dit absoluut noodsaaklik is. Herhaalde ontdooiing en herbevriesing sal sy lewensduur aansienlik verminder.

Aanbeveel: